一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法,HPLC法作为分析方法,检测鱼肉中甲氧苄啶含量。该方法可简化样品的前处理过程,节省有机溶剂的使用,操作简便。

二、实验目标物

甲氧苄啶(CAS:738-70-5)。

三、应用范围

本方法适用于鱼肉中甲氧苄啶残留的HPLC检测及确证。

四、实验材料

biocomma® Copure® MCX固相萃取柱60 mg/3 mL(Cat。 No。 COMCX360)。

五、实验步骤

1、样品提取
准确称取鱼肉5.0 g于50 mL离心管中,加入三氯甲烷15 mL、甲醇14 mL、0.1 mol/L硫酸6 mL,涡旋2 min,4000 r/min离心3 min,取上清液加入250 mL的分液漏斗中,继续加甲醇14 mL,4000 r/min离心3 min,取上清液合并加入250 mL的分液漏斗中;分液漏斗中加入2 mL 2 mol/L氢氧化钾,加入30 mL二氯甲烷,振摇分层,取下层液,继续加入30 mL二氯甲烷,振摇分层,取下层液合并,于40 ℃旋蒸至近干,加6 mL 5 %乙酸水溶液溶解,待净化。

2、SPE柱净化
(1)活化:MCX固相萃取柱使用前用5 mL甲醇、5 mL 5 %乙酸水溶液活化。
(2)上样和洗脱:往固相萃取柱中加入待净化液,弃去流出液,加5 mL 5 %乙酸水溶液、5 mL甲醇淋洗,弃去淋洗液,抽干小柱;加15 mL 5 %氨化甲醇洗脱,收集流出液(上样、洗脱过程保持流速1 mL/min)。
(3)重新溶解:洗脱液40 ℃下氮吹至近干,用1 mL甲醇溶解,经0.22 μm滤膜过滤,供HPLC测定。

3、HPLC条件
设备:Waters Alliance 2695
色谱柱:Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器:Waters 2996 DAD检测器
检测波长:280 nm
流动相:A:甲醇 B:0.5 %高氯酸水溶液
洗脱方式:等度洗脱, A : B=30 : 70
流速:1.0 mL/min
进样体积:20 μL

六、实验结果

1、2.0 mg/kg鱼肉中甲氧苄啶的添加回收结果
表1 2.0 mg/kg鱼肉中甲氧苄啶的添加回收结果


重庆彩票网 2、添加水平为2.0 mg/kg甲氧苄啶检测的液相色谱图


图1 添加水平为2.0 mg/kg甲氧苄啶检测的液相色谱图

本方法回收率和RSD满足标准要求。

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