一、实验目的

本研究利用免疫亲和柱法作为样品的前处理方法,HPLC作为分析方法,检测玉米、酱油中呕吐毒素的含量。该方法可简化样品的前处理过程,节省有机溶剂的使用,操作简便。

二、实验目标物

呕吐毒素(CAS:51481-10-8)。

三、应用范围

本方法适用于玉米、酱油中呕吐毒素检测的HPLC检测及确证。

四、实验材料

biocomma® Copure® 呕吐毒素免疫亲和柱3 mL (Cat. No. COAFDON103)。

五、实验方法

1、样品提取
玉米样品前处理
称取5.0 g(精确到0.01g)经粉碎玉米置50 mL离心管,加入20 mL水,涡旋混匀,振荡10 min,4000 r/min下离心5 min,上清液全部过滤,再加20 mL水重复提取一次,合并滤液,加水定容至50 mL,滤液待用。

酱油前处理
称取老抽酱油1.0 g(精确到0.01 g)到50 mL离心管,加入10 mL水,振荡10 min,过玻璃纤维滤纸,用5 mL x2水冲洗离心管两次,合并滤液,待净化。

2、免疫亲和柱净化
(1)上样:将10 mL或者20 mL注射器连接于免疫亲和柱上端,取待净化液样品液1 mL以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱,弃掉流出的液体。
(2)淋洗和洗脱:加20 mL水淋洗柱子,分两次淋洗,弃掉流出的液体,抽干小柱;加入4 mL甲醇缓慢洗脱(先浸泡约30s),分两次添洗脱,流速约为2-3秒/滴,收集流出液。
(3)重新溶解:在50 °C下氮吹至近干,加20 %甲醇水1 mL重新溶解。经0.22 μm滤膜过滤,待上机测试。

3、HPLC条件
设备:Waters Alliance 2695
色谱柱:Inertsustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器 :Waters 2696 DAD检测器
检测波长:218 nm
流动相:A:甲醇 B:水
洗脱方式:等度洗脱, A : B=20 : 80
流速:1.0 mL/min
进样体积:20 μL

六、实验结果

1、1.0 mg/kg玉米、酱油中呕吐毒素的添加回收结果
表1 1.0 mg/kg玉米、酱油中呕吐毒素的添加回收结果

2、 添加水平为1。0 mg/kg呕吐毒素的标准液相色谱图


图1 添加水平为1.0 mg/kg呕吐霉毒素的标准液相色谱图

本方法回收率和RSD满足标准要求。

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