赭曲霉毒素A的介绍

赭曲霉毒素主要有7种结构类似的化合物,其中赭曲霉毒素A毒性最大,产毒量最高、对农产品污染也最严重。赭曲霉毒素A是由多种曲霉菌和青霉菌产生,普遍存在于热带和气候温和的地区,常现于燕麦,大麦,小麦和玉米等农作物上。它对动物和人类的毒性主要有肾脏毒、肝毒、致畸、致癌、致突变和免疫抑制作用,是继黄曲霉毒素后又一个引起世界广泛关注的霉菌毒素。

赭曲霉毒素A的食品安全限量规定

国家食品安全标准《GB 2761-2017》规定谷物、豆类及其制品中赭曲霉毒素A的允许量不得超过5 μg/kg。


逗点生物开发出使用免疫亲和柱法检测食品中赭曲霉毒素A的含量,平均回收率在110.7%,RSD1.1 %,为客户提供关于赭曲霉毒素A检测有效的解决方案。

一、实验目的

本研究利用免疫亲和柱法作为样品的前处理方法,HPLC作为分析方法,检测食品中赭曲霉毒素A的含量。该方法可简化样品的前处理过程,节省有机溶剂的使用,操作简便。

二、实验目标物

赭曲霉毒素A(CAS: 303-47-9)。

三、应用范围

本方法适用于食品中赭曲霉毒素A含量检测的HPLC检测及确证。

四、实验材料

biocomma® Copure® 赭曲霉毒素免疫亲和柱3 mL (Cat. No. COAFOCH103)。

五、实验方法

1、样品提取
1.1大米
重庆彩票网 称取5.0 g(精确到0.01 g)食品到50 mL离心管,加25 mL70 %甲醇水溶液,振荡30 min,4000 r/min下离心5 min,取上清液5 mL于15 mL离心管中,加10 mL混合磷酸盐溶液(称取8.0 g 氯化钠,1.2 g磷酸氢钠,0.2 g磷酸二氢钾,0.2 g氯化钾于990 mL水中,浓盐酸调节PH=7.0,定容至1000 mL),混匀待净化。

1.2食用油
称取5.0 g(精确到0.01g)食用油到50 mL离心管,加1 g NaCl,20 mL 70%甲醇水溶液,振荡30 min,4000 r/min下离心5 min,取上清液1 mL,加入4 mL水,混匀待净化。

1.3酱油
称取5.0 g(精确到0.01 g)酱油到50 mL离心管,加70%甲醇水定容至20 mL,超声5 min,振荡10 min,取上清液1 mL,加入4 mL水,混匀待净化。

1.4葡萄干
称取搅碎5.0 g(精确到0.01 g)葡萄干到50 mL离心管,加提取液(称取150.0 g氯化钠、20.0 g碳酸氢钠溶于约950 mL水中,加水定容至1 L)20 mL,超声5 min,振荡5 min,4000 r/min离心5 min,取上清液1 mL到4 mL缓冲溶液(称取8.0 g氯化钠、1.2 g磷酸氢钠、0.2 g磷酸二氢钾、0.2 g氯化钾溶解于约990 mL水中,用浓盐酸调节pH 至7.0,用水稀释至1 L),混匀待净化。

1.5白酒
称取白酒5.0 g(精确到0.01 g)到50 mL离心管,加碳酸氢钠溶液(10 g/L)定容至20 mL,振荡15 min,取上清液1 mL到4 mL缓冲溶液(称取8.0 g氯化钠、1.2 g磷酸氢钠、0.2 g磷酸二氢钾、0.2 g氯化钾溶解于约990 mL水中,用浓盐酸调节pH=7.0,用水稀释至1 L),混匀待净化。

2、免疫亲和柱净化
(1)上样:取待净化样品2 mL以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱,弃掉流出的液体。
(2)淋洗和洗脱:加入20 mL水淋洗柱子,分两次淋洗,弃掉流出的液体,抽干小柱;加入2 mL甲醇缓慢洗脱亲和柱,流速约为2-3秒/滴。
(3 )重新溶解:40 ℃下氮吹至近干,加1 mL初始流动相,0.22 μm滤膜过滤,供HPLC分析。

3、HPLC条件
设备:Waters Alliance 2695
色谱柱:Inertsustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器:Waters 2475 荧光检测器
检测波长:激发波长: 274 nm 发射波长: 440 nm
流动相:乙腈:2 %乙酸水溶液=49.5:50.5
流速:1 mL/min
进样体积:20 μL

六、实验结果

1、25.0 μg/kg食品中赭曲霉毒素A的添加回收结果
表1 25.0 μg/kg食品中赭曲霉毒素A的添加回收结果


2、添加水平为25.0 μg/kg食品中赭曲霉毒素A的液相色谱图


图1 添加水平为25.0 μg/kg食品中赭曲霉毒素A的液相色谱图

结论:本方法回收率和RSD满足标准要求。

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